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昆虫细胞蛋白表达服务

杆状病毒表达载体系统(baculovirus expression vector system,BEVS)是当今基因工程四大表达系统之一。BEVS属于真核表达系统,通过BEVS得到的重组病毒易于筛选、具有翻译后修饰功能、表达外源基因的效率较高。BEVS还可以同时表达多个外源基因,在分泌蛋白生物活性的同时增加产量。因此,BEVS在科研和工业生产中通常应用于大规模重组蛋白的制备。

实验流程

昆虫细胞蛋白表达服务流程图

实验步骤实验内容
密码子优化及基因合成分析基因序列,优化密码子,合成目的基因,提供载体
重组质粒构建构建含有目的基因的载体质粒
重组杆状病毒载体构建将目的基因亚克隆到合适的杆状病毒转移载体上
重组杆状病毒扩大培养转染昆虫细胞,制备病毒贮液,空斑实验测定病毒滴度
表达条件优化检测并优化表达条件(细胞株、MOI、时间温度等)
大规模杆状病毒昆虫细胞培养根据优化条件,可提供大规模细胞培养
蛋白分析和纯化通过SDS-PAGE电泳检测每步结果并控制最终产品质量。
通过Western-blot验证目标蛋白正确性。
通过亲和层析,离子交换,疏水及凝胶过滤等方法纯化表达的重组蛋白。
去除不需要的纯化标签。

 
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